วิธีดูแลเซลล์ให้แข็งแรง

เงื่อนไขพื้นฐานสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์

1. สื่อการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่เหมาะสม

สื่อเพาะเลี้ยงเซลล์ที่เหมาะสมเป็นหนึ่งในเงื่อนไขที่สำคัญที่สุดสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์และการเพิ่มจำนวนในหลอดทดลอง อาหารเลี้ยงเชื้อไม่เพียงแต่ให้สารอาหารและสารพื้นฐานแก่เซลล์เพื่อส่งเสริมการเจริญเติบโตและการเพิ่มจำนวนของเซลล์ แต่ยังให้สภาพแวดล้อมสำหรับการเจริญเติบโตและการสืบพันธุ์ของเซลล์ที่เพาะเลี้ยง

2. เซรั่มคุณภาพสูง

ปัจจุบันสื่อสังเคราะห์ส่วนใหญ่ต้องการการเติมเซรั่ม เซรั่มเป็นส่วนประกอบที่สำคัญที่สุดอย่างหนึ่งในการเพาะเลี้ยงเซลล์ ซึ่งประกอบด้วยปัจจัยการเจริญเติบโตที่หลากหลายและสารอาหารอื่นๆ ที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์

3. อุณหภูมิการเจริญเติบโตของเซลล์คงที่

เพื่อรักษาการเจริญเติบโตอย่างแข็งแรงของเซลล์ที่เพาะเลี้ยง จะต้องมีอุณหภูมิที่คงที่และเหมาะสม

4. สภาพแวดล้อมของก๊าซที่เหมาะสม

ก๊าซเป็นหนึ่งในเงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับการอยู่รอดของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม และก๊าซที่ต้องการส่วนใหญ่เป็นออกซิเจนและคาร์บอนไดออกไซด์

5. อุณหภูมิการเพาะเลี้ยงเซลล์

เพื่อรักษาการเจริญเติบโตอย่างแข็งแรงของเซลล์ที่เพาะเลี้ยง จะต้องมีอุณหภูมิที่คงที่และเหมาะสม เซลล์ประเภทต่าง ๆ มีข้อกำหนดที่แตกต่างกันสำหรับอุณหภูมิวัฒนธรรม อุณหภูมิมาตรฐานสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ของมนุษย์คือ 36.5 องศา ± 0.5 องศา การเบี่ยงเบนจากช่วงอุณหภูมินี้จะส่งผลต่อเมแทบอลิซึมของเซลล์และถึงกับตายได้

6. สภาพแวดล้อมของก๊าซที่เหมาะสม

ก๊าซเป็นหนึ่งในเงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับการอยู่รอดของการเพาะเลี้ยงเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม และก๊าซที่ต้องการส่วนใหญ่เป็นออกซิเจนและคาร์บอนไดออกไซด์ ออกซิเจนมีส่วนร่วมในวัฏจักรกรดไตรคาร์บอกซิลิก โดยผลิตพลังงานสำหรับการเจริญเติบโตและการเพิ่มจำนวนของเซลล์ และสังเคราะห์ส่วนประกอบต่างๆ ที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์

การปนเปื้อนทั่วไปของการเพาะเลี้ยงเซลล์

1. การปนเปื้อนของแบคทีเรีย

การปนเปื้อนของแบคทีเรียเป็นเรื่องธรรมดาที่สุด เมื่อดำเนินการไม่ถูกต้องเล็กน้อยจะทำให้เกิดการปนเปื้อนของเซลล์ หลังจากการปนเปื้อนของแบคทีเรีย จะปรากฏเป็นแถบทรายสีดำบางๆ เมื่อสังเกตใต้กล้องจุลทรรศน์ รูปแท่ง ฯลฯ ประการที่สอง สื่อเพาะเลี้ยงจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองและขุ่น และตะกอนรูปทรายละเอียดสามารถมองเห็นได้ชัดเจนในจานเพาะเชื้อ และมีกลิ่นแปลก ๆ เป็นครั้งคราว

2. การปนเปื้อนของเชื้อรา

วิธีการเพาะเลี้ยงเชื้อราที่ปนเปื้อนเชื้อรามีความชัดเจนและโปร่งใส ไม่เหมือนการระบาดครั้งใหญ่ของการติดเชื้อแบคทีเรีย ดังนั้นจึงเป็นการยากที่จะตรวจพบได้ตั้งแต่เนิ่นๆ บางครั้งดูเหมือนเส้นใยใต้กล้องจุลทรรศน์ บางครั้งดูเหมือนปะการัง และเส้นใยสีดำที่บางมากจะค่อยๆ เติบโต ซึ่งเมื่อสายเกินไปก็ยากที่เซลล์จะได้รับการช่วยเหลือ

3. การปนเปื้อนของเชื้อรา

สอดคล้องกับการติดเชื้อรา เนื่องจากอาหารเพาะเชื้อมีความชัดเจน การปนเปื้อนของเชื้อราจึงยากต่อการตรวจพบตั้งแต่เนิ่นๆ และมักจะสายเกินไป สิ่งเจือปนที่ตกตะกอนปรากฏขึ้นอย่างช้าๆ ในอาหารเลี้ยงเชื้อ และวัตถุที่ลอยด้วยมวลใยสามารถเห็นได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ เช่น catkins ในสายลม เซลล์ยังคงเติบโตได้ แต่เมื่อเวลาผ่านไป เซลล์เสื่อมสภาพและหยุดเติบโต

4. การติดเชื้อไมโคพลาสมา

อาหารเลี้ยงเชื้อจะขุ่น หลังจากที่มัยโคพลาสมาติดเชื้อในเซลล์ การเปลี่ยนแปลงของไซโตพาธิกจะไม่ชัดเจน แต่สถานะของเซลล์จะแย่ลงและการเจริญเติบโตช้าลง อาจมีจุดสีดำเล็ก ๆ อยู่ใต้กล้องจุลทรรศน์ แต่อาหารเลี้ยงเชื้อโดยทั่วไปจะไม่ขุ่น หลังจากผ่านเซลล์แล้ว จุดสีดำระหว่างเซลล์ก็ปรากฏขึ้น เซลล์ถูกแวคิวโอเลต และเซลล์จำนวนมากมีลักษณะคล้ายกับการตายของเซลล์และเนื้อร้าย ในที่สุดเซลล์ก็ลอยและตายไปอย่างสมบูรณ์

การป้องกันการปนเปื้อนของเซลล์

การกำหนดกฎเกณฑ์และข้อบังคับที่ดีสามารถช่วยลดการปนเปื้อนของเซลล์ได้อย่างมาก รวมถึงระบบการเข้าใช้ บรรทัดฐานการทำงาน และระบบการจัดการรายวัน

ระบบการเข้าออก : รวมทั้งบุคลากรและวัสดุ บุคลากรต้องได้รับการฝึกอบรมก่อนจึงจะปฏิบัติงานได้ด้วยตนเองและต้องปฏิบัติตามข้อกำหนดการสวมใส่ก่อนเข้าห้องปฏิบัติการ เช่น เสื้อคลุมสีขาว เสื้อกาวน์ ชุดป้องกัน หน้ากาก ถุงมือ เป็นต้น สำหรับรายการที่ต้องการ สิ่งของที่ไม่ใช้แล้วทิ้งควรจัดโดยเคร่งครัด ต้องซื้อสินค้าที่ผ่านการฆ่าเชื้อและฆ่าเชื้อแล้ว และสินค้าที่ซื้อต้องซื้อจากช่องทางปกติและเชื่อถือได้ เซลล์ที่ซื้อมาใหม่ควรได้รับการทดสอบและตรวจสอบก่อนใช้งาน

ข้อกำหนดการใช้งาน: เป็นการดีที่สุดที่จะกำหนดข้อกำหนดสำหรับการปฏิบัติงานประจำ และบุคลากรในห้องปฏิบัติการต้องปฏิบัติตามข้อกำหนดในการปฏิบัติงาน ซึ่งไม่สามารถเปลี่ยนแปลงได้ตามต้องการ และยังปลูกฝังนิสัยการปฏิบัติงานที่ดีสำหรับบุคลากรในห้องปฏิบัติการด้วย ตัวอย่างเช่น หลังจากดูดทิปปิเปตแล้ว ทิปจะไม่ถูกขยายเข้าไปในสื่อเป็นครั้งที่สอง และจะมีการดูดสื่อในปริมาณที่เพียงพอหนึ่งครั้ง เมื่อเติมของเหลว ควรเติมของเหลวลงในสารแขวนลอยให้มากที่สุด ซึ่งสามารถป้องกันการปนเปื้อนของมัยโคพลาสม่าและการปนเปื้อนข้ามเซลล์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ นอกจากนี้ หากเป็นไปได้ ให้ใช้งานเซลล์ครั้งละหนึ่งเซลล์เท่านั้น และควรมีช่วงเวลาระหว่างเซลล์เพียงเล็กน้อยเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม

ระบบการจัดการรายวัน: ประกอบด้วยกฎและวิธีการสำหรับการใช้ การทำความสะอาด และการบำรุงรักษาสิ่งแวดล้อมและวัสดุสิ้นเปลือง รีเอเจนต์ ฯลฯ นอกจากนี้ยังมีการจัดการปริมาณการใช้ สินค้าคงคลัง และการจัดซื้อรีเอเจนต์และวัสดุสิ้นเปลือง รวมถึงการจัดการสินค้าคงคลังสองระดับของ ตัวอย่างเซลล์ สำหรับแหล่งการปนเปื้อนที่หาไม่ง่าย ควรทำการทดสอบเป็นประจำ ส่วนใหญ่เป็นการปนเปื้อนของมัยโคพลาสม่าและการปนเปื้อนข้ามเซลล์

BKMAM Bio จัดหาวัสดุสิ้นเปลืองที่สอดคล้องกันสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์:

จานเพาะเชื้อทรงกลม/สี่เหลี่ยมพลาสติกแบบใช้แล้วทิ้ง:

วัสดุโพลีสไตรีนที่มีความโปร่งใสสูง (PS);

พื้นผิวเรียบและแบน และไม่มีการบิดเบือนทางแสงของเซลล์ภายใต้การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์

การออกแบบการวางซ้อนทำให้การซ้อนและการจัดเก็บทำได้ง่ายขึ้น

การฆ่าเชื้อเอทิลีนออกไซด์ (EO);

ทนต่อการสึกหรอและการกัดกร่อน

การรักษาอย่างต่อเนื่องของอาหารเพาะเลี้ยงเซลล์:

วัสดุโพลีสไตรีน (PS);

การฆ่าเชื้อด้วยลำแสงอิเล็กตรอนไม่มี pyrogen ไม่มีสารพิษ

การรักษาพื้นผิวพลาสม่าสูญญากาศการยึดเกาะของเซลล์ที่ดีเยี่ยม

พื้นผิวเรียบและแบน และไม่มีการบิดเบือนทางแสงของเซลล์ภายใต้การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์

การออกแบบที่วางซ้อนกันได้ทำให้การซ้อนและการจัดเก็บทำได้ง่ายขึ้น

แผ่นเพาะเลี้ยงเซลล์พลาสติก:

วัสดุโพลีสไตรีน (PS);

เหมาะสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ปกติ ชนิดแผ่นทรีทเม้นท์ที่ไม่ยึดติด

ไม่มี pyrogen, ไม่มีสารพิษ, ฆ่าเชื้อ;

บรรจุภัณฑ์อิสระชนิดฉีกขาดง่าย ใช้งานง่าย;

การรักษาอย่างต่อเนื่องของแผ่นเพาะเลี้ยงเซลล์:

วัสดุโพลีสไตรีน (PS);

การรักษาแบบยึดติด (TC Treatment) ชนิดแผ่น เหมาะสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ยึดติด

ไม่มี pyrogen, ไม่มีสารพิษ, ฆ่าเชื้อ;

บรรจุภัณฑ์อิสระชนิดฉีกขาดง่าย ใช้งานง่าย;

ทั้งหมดเป็นพื้นแบน

การรักษาอย่างต่อเนื่องของขวดเพาะเลี้ยงเซลล์:

วัสดุโพลีสไตรีน (PS);

การฆ่าเชื้อด้วยลำแสงอิเล็กตรอนไม่มี pyrogen ไม่มีสารพิษ

การรักษาพื้นผิวพลาสม่าสูญญากาศการยึดเกาะของเซลล์ที่ดีเยี่ยม

ฝาปิดระบายอากาศได้ซึ่งเอื้อต่อการแลกเปลี่ยนก๊าซและป้องกันไม่ให้จุลินทรีย์ผ่านเข้าไป

Cryovials สปินภายใน/ภายนอก:

วัสดุโพรพิลีนบริสุทธิ์ 100 เปอร์เซ็นต์ (PP);

สามารถทนต่อการฆ่าเชื้อ 15psi, 121 องศา;

ผนังท่อหนาขึ้นและตัวท่อมีมาตราส่วนและพื้นที่เขียน

มีซีลวงแหวนซิลิโคนระหว่างเกลียวฝาครอบท่อและตัวท่อเพื่อให้แน่ใจว่าแน่น

ไม่มี DNase ไม่มี RNase ไม่มี pyrogen ไม่มีเอนโดทอกซิน